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韬哥Lv14   
请教:基因工程中,用CaCl2处理细菌,增加其通透性的是细胞膜还是细胞壁?     
请教:基因工程中,用CaCl2处理细菌,增加其通透性的是细胞膜还是细胞壁?
 0  已被阅读了111次  楼主 2020-04-02 10:57:39
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2F
韬哥Lv14   


三明北附 范晓兰 回复:

 

    秒懂百科:CaCl2
    1.将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀,同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞
    细胞壁通透性发生变化,极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基-磷酸钙复合物。
    联合其它的二价金属离子(如MnCo)、DMSO或还原剂等物质处理细菌,则可使转化率提高1001000倍。
    2.此时,将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激(90s),细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动,并随机出现许多间隙,外源DNA就可能被细胞吸收。进入细胞的外源DNA分子通过复制、表达,实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。
    3.将转化后的细胞在选择性培养基上培养,筛选出带有外源DNA分子的阳性克隆。


    电转法
    电击法不需要预先诱导细菌的感受态,依靠短暂的电击,促使DNA进入细菌,转化率最高能达到109~1010转化子/ug闭环DNA。因操作简便,愈来愈为人们所接受。

 

 0   2020-04-02 10:58:29  回复
admin
3F
韬哥Lv14   


泉港二中 刘华涛 回复:

 

  浙科版高中生物选修教材认为改变的是细胞壁的通透性,北师大版、苏教版高中生物选修教材均认为改变的是细胞膜的通透性。人教版高中生物教材未有明确表述。那么,感受态法改变的到底是细胞膜还是细胞壁的通透性呢?其原理是什么呢?

  张惠展《基因工程概论》认为:“将处于对数生长期的细菌置入0℃的CaCl2低渗溶液中,使细胞膨胀,同时Ca2+使细胞膜磷脂层形成液晶结构,使得位于外膜与内膜间隙中的部分核酸酶离开所在区域,这就构成了大肠杆菌人工诱导的感受态。此时加入DNA, Ca2+又与DNA结合形成抗脱氧核糖核酸酶(Dnase)羟基-磷酸钙复合物,并黏附在细菌细胞膜的外表面上。经短暂的42℃热脉冲处理后,细菌细胞膜的液晶结构发生剧烈扰动,随之出现许多间隙,致使通透性增加,DNA分子便趁机进入细胞内。”

  Prescott's Microbiology9th认为:“包括大肠杆菌在内的多种微生物,自然情况下都不处于转化的感受态,这些细菌必须经过一定的处理,人为地令其处于感受态。电击和氯化钙处理是常用的两种方法。两种方法都使细胞膜对DNA的通透性暂时增加,都能令大肠杆菌处于人为的感受态中。”

  可见,多数教材倾向于感受态法改变的是细胞膜的通透性。

主要参考文献:
[1]
张惠展.基因工程概论[M].华东理工大学.1999.
[2]Willey,Sherwood,Woolverton.Prescott'sMicrobiology,9th,2014

仅供参考

 

 0   2020-04-02 11:00:23  回复

回复:请教:基因工程中,用CaCl2处理细菌,增加其通透性的是细胞膜还是细胞壁?

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